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        最新公告:

        溫州明杰包裝機械有限公司(www.yunshuijingxiu.com)是一家專業化機械外殼、燈具、五金配件加工的現代化公司,主要致力于噴塑加工、噴漆加工、電泳加工及金屬表面處理,公司擁有完善的自動化加工生產線、精密的生產設備,以嚴格的生產管理模式,為客戶五金電泳加工保駕護航。

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        溫州電泳加工常見的電泳液有哪些配制呢?

        添加時間:2018/12/21
        常用染料、電泳緩沖液、凝膠加樣液和雜交液的配制:
        1.1%溴酚藍(bromophenol blue):加1g水溶性鈉型溴酚藍于100ml水中,攪拌或渦旋混合直到完全溶解。
        2.1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF):溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
        3.5mg/ml的溴化乙錠(EB,ethidium bromide):小心稱取0.5g溴化乙錠,轉移到廣口瓶中,加100ml水,用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管,于4℃儲存。工作濃度0.5mg/L水溶液。

        一、DNA電泳
        1.?Tris-乙酸(TAE:Tris/Acetate/EDTA)
        濃貯存液/L(50×):2mol/L Tris-堿,1 mol/L 乙酸,50 mmol/L EDTA
        方法:?242.2 g Tris-堿,用300mL水加熱攪拌溶解后,加57mL冰乙酸,加入100mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0),用冰乙酸調pH值至8.0,定容為1L。
        2. Tris-硼酸(TBE:Tris/Borate/EDTA)
        濃貯存液/L (5×) : 90mmol/L Tris-堿,890mmol/L 硼酸鹽,20mmol/L EDTA(pH8.0)
        方法:54g Tris堿、27.5硼酸、20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),水定容至1L。
        使用液:(0.5×):0.045mol/L Tris-磷酸,0.001mol/L EDTA
        注:進行聚丙烯酰胺凝膠電泳使用的是1×TBE,瓊脂糖凝膠電泳使0.5×TBE,這是因為聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小,需加強離子強度,提供稍高一些的電流。
        3. Tris-磷酸(TPE)
        濃貯存液/L(10×):0.9mol/L Tris-磷酸、0.02mol/L EDTA
        方法:108g Tris堿、15.5ml 85%磷酸(1.679g/ml)、40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),?水定容至1L。
        使用液(1×):0.09mol/L Tris-磷酸、0.002mol/L EDTA
        4.?Tris-甘氨酸(Tris-甘氨酸緩沖液用于SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。)
        濃貯存液/L(5×):125mmol/L Tris 、1.25mol/L EDTA、0.5%SDS
        方法:15.1g Tris堿、9.4甘氨酸(電泳級)(pH8.3)、50ml 10%SDS(電泳級)
        使用液(1×):25mmol/L Tris 、250mmol/L EDTA、0.1%SDS
        5.TBS 電泳緩沖液:100ml TBE,0.5ml的10% SDS。
        6.6×上樣液:0.25%溴酚藍(BPB),40%蔗糖,10mmol/L EDTA(pH8.0)。即2.5ml 1%溴酚藍,2.5ml 1%二甲苯青FF,4g蔗糖,補足水到10ml,4℃保存。
        二、RNA電泳
        1.RNA標準相對分子質量:如28S和18SrRNA以及9S兔β-球蛋白mRNA,其RNA大小為6333、2366和710個核苷酸。
        2.DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水:
        0.1% DEPC,水,即加1ml DEPC(diethlpyrocarbonate)于1L水中,使DEPC的體積分數為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15psi條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺其反應,不可用DEPC處理

        Tris緩沖液。
        3.5×FGRB(formaldehyde gel-running buffer):
        100mmol/L 3-(N-嗎啉代)-丙磺酸(MOPS,pH7.0),40mmol/L醋酸鈉,5mmol/L EDTA(pH8.0)。即準確稱取20.93g MOPS用DEPC處理水溶解,再加入13.3ml的3 mol/L ?????
        NaAc(pH7.0),10ml的0.5 mol/L EDTA(pH8.0),最后定容至1000ml,過濾滅菌后避光保存(pH7.3)。
        4.RNA凝膠上樣緩沖液:
        50%甘油、1mmol/L EDTA(pH8.0)、0.25%溴酚藍、0.25%二甲苯青FF。即2.5ml甘油、10μL 0.5 mol/L EDTA(pH8.0),1.25ml 1%溴酚藍,1.25ml 1%二甲苯青FF,用DEPC處理水定容至5ml,分裝后-70℃保存。
        5.RNA膠(1%):
        1g瓊脂糖加62ml DEPC水,加熱溶化后冷卻至60℃,再加20ml的5×FGRB和17.8ml的37%甲醛,混勻后制膠。
        6.甲酰胺(去離子):
        將10ml甲酰胺和1g離子交換樹脂混合,室溫攪拌1h后用Whatman濾紙過濾,等分成1ml于-70℃貯存。
        7.其他試劑:
        37%甲醛、80%乙醇(利用DEPC處理水配制)。
        三、蛋白質電泳
        1.電泳用標準蛋白Marker
        2.10%(M/V)過硫酸銨(APS):
        1g APS加ddH2O至10ml。使用時盡量現配現用,4℃存則兩周內用完,最多不能超過一個月。-20℃可存兩個月,但一旦解凍后盡快用完。
        3.TEMED和DTT(dithiothretol):置于棕色瓶中,存放在4℃冰箱。
        蛋白質樣品溶解液:SDS 100mg,巰基乙醇0.1 mL,甘油1.0mL,溴酚藍2mg,Tris-HCL緩沖溶液2mL,加蒸餾水至總體積10mL。

        4.30%膠母液(Acr-Bis):
        30% Acrylamide、0.8%bis,即Acrylamide 30g、bis 0.8g定容至100ml,可在4℃存放數月。
        5.分離膠緩沖液(pH8.8):
        3mol/L Tris,即Tris 36.3g,加入1mol/L HCl溶液48.0mL,pH8.8,定容100ml。
        6.濃縮膠緩沖液(pH6.8):
        1mol/L Tris,即Tris?12.1g,pH6.7,定容100ml。
        7.10×電極緩沖液:
        50mmol/L Tris、384mmol/L甘氨酸、1%SDS。即Tris 6g、Glycine28.8g、SDS 10g,調pH至8.3,定容至1L。
        8.4×SDS上樣緩沖液:
        200mmol/L Tris-HCl(pH6.8)、8%SDS、0.04%溴酚藍、40%甘油、400mmol/L DTT(或8%β-巰基乙醇),4℃保存。
        9.2×SDS上樣緩沖液:
        0.1 mol/L Tis(pH6.8)、4%SDS、0.02%溴酚藍、20%甘油、200mmol/L DTT(或4%β-巰基乙醇),4℃保存。
        10.染色液:1g考馬斯亮藍R-250、500ml甲醇、100ml冰醋酸,定容至1L。
        11.脫色液:50ml甲醇、75ml冰醋酸,加水定容至1L。

        ⑹蛋白電泳試劑及其配制
        分離膠緩沖溶液:Tris 36.3g,加入1mol/L HCl溶液48.0mL,再加入蒸餾水到100mL,pH8.9。
        濃縮膠緩沖溶液:Tris 5.98g,加1mol/L HCL溶液48.0mL,加蒸餾水到100mL,pH6.7。
        凝膠貯液:Acr 30.0g,Bis0.8g,加蒸餾水到100mL。
        電極緩沖溶液:SDS 1g,Tris 6g,甘氨酸28.8g,加蒸餾水至1000mL,pH8.3。
        固定液:取50%甲醇454mL,冰醋酸46mL,混勻。
        SDS染色液:1.25g考馬斯亮藍R-250,加454mL 50%甲醇溶液和46mL冰醋酸,混勻。脫色液:取乙醇250ml,冰醋酸100mL,加蒸餾水到1000mL,600C脫色。




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